El método de Golgi - Golgi's method
El método de Golgi es una técnica de tinción de plata que se utiliza para visualizar el tejido nervioso bajo microscopía óptica. El método fue descubierto por Camillo Golgi , un médico y científico italiano , quien publicó la primera imagen hecha con la técnica en 1873. Inicialmente fue llamado reacción negra ( la reazione nera ) por Golgi, pero se hizo más conocido como la tinción de Golgi. o más tarde, método de Golgi.
La tinción de Golgi fue utilizada por el neuroanatomista español Santiago Ramón y Cajal (1852-1934) para descubrir una serie de hechos novedosos sobre la organización del sistema nervioso, que inspiraron el nacimiento de la doctrina de las neuronas . Finalmente, Ramón y Cajal mejoró la técnica utilizando un método que denominó "doble impregnación". La técnica de tinción de Ramón y Cajal, todavía en uso, se llama Tinción de Cajal.
Mecanismo
Las células del tejido nervioso están densamente empaquetadas y se puede obtener poca información sobre sus estructuras e interconexiones si se tiñen todas las células. Además, las delgadas extensiones filamentosas de las células neurales, incluido el axón y las dendritas de las neuronas, son demasiado delgadas y transparentes para ser vistas con técnicas de tinción normales. El método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. El mecanismo por el cual esto sucede aún se desconoce en gran medida. Las dendritas, así como el soma celular, están claramente teñidas de marrón y negro y pueden seguirse en toda su longitud, lo que permitió a los neuroanatomistas rastrear las conexiones entre neuronas y hacer visible la compleja estructura de redes de muchas partes del cerebro y la médula espinal. .
La tinción de Golgi se logra impregnando el tejido nervioso fijado con aldehído con dicromato de potasio y nitrato de plata . Las células así teñidas se rellenan mediante microcristalización de cromato de plata .
Técnica
Según SynapseWeb, esta es la receta de la técnica de tinción de Golgi:
- Sumerja un bloque (aprox. 10x5 mm) de tejido cerebral fijado con formaldehído (o paraformaldehído - glutaraldehído perfundido) en una solución acuosa al 2% de dicromato de potasio durante 2 días
- Seque el bloque en breve con papel de filtro .
- Sumerja el bloque en una solución acuosa al 2% de nitrato de plata durante otros 2 días.
- Cortar secciones aprox. 20–100 µm de espesor.
- Deshidratar rápidamente en etanol , aclarar y montar (por ejemplo, en Depex o Enthalan).
Desde entonces, esta técnica se ha perfeccionado para sustituir el precipitado de plata con oro sumergiendo la muestra en cloruro de oro y luego en ácido oxálico , seguido de la eliminación de la plata con tiosulfato de sodio . Esto conserva un mayor grado de estructura fina con los detalles ultraestructurales marcados por pequeñas partículas de oro.
Citar
Ramón y Cajal dijo sobre el método de Golgi:
- Expresé la sorpresa que experimenté al ver con mis propios ojos los maravillosos poderes reveladores de la reacción cromo-plata y la ausencia de cualquier excitación en el mundo científico suscitado por su descubrimiento.
- Recuerdos de mi vida, Vol. 2, Historia de mi labor científica . Madrid: Moya, 1917, pág. 76.
Referencias
enlaces externos
- Microfotografía de una célula de la corteza teñida con Golgi . Galería de imágenes de IHC.
- Impregnaciones de Golgi . Imágenes del cerebro de las moscas.
- Visualización de espinas dendríticas mediante el método de Golgi . SynapseWeb. Incluye un estudio de lapso de tiempo de la impregnación de Golgi.
- Berrebi, Albert: Biología celular de las neuronas: estructura y métodos de estudio . (en PDF)
- Imágenes de cortes de cerebro teñidas que incluyen las "neuronas teñidas de Golgi" en el proyecto BrainMaps
