Análogo de aminoácido fotorreactivo - Photo-reactive amino acid analog

Los análogos de aminoácidos fotorreactivos son análogos artificiales de aminoácidos naturales que se pueden utilizar para la reticulación de complejos de proteínas. Los análogos de aminoácidos fotorreactivos pueden incorporarse en proteínas y péptidos in vivo o in vitro . Los análogos de aminoácidos fotorreactivos de uso común son análogos de diazirina fotorreactivos a leucina y metionina , y para -benzoilfenilalanina. Tras la exposición a la luz ultravioleta , se activan y se unen covalentemente a las proteínas interactuantes que se encuentran a unos pocos angstroms del análogo de aminoácido fotorreactivo.

L-Photo-leucina y L -Photo-metionina son análogos de la de origen natural L Leucina y L metionina amino ácidos que se incorporan de forma endógena en la secuencia primaria de las proteínas durante la síntesis usando la maquinaria de traducción normal. Luego se activan con luz ultravioleta (UV) para reticular covalentemente proteínas dentro de los dominios de interacción proteína-proteína en su entorno in vivo nativo . El método permite la determinación y caracterización de interacciones proteicas estables y transitorias en las células sin la adición de reticulantes químicos y disolventes asociados que pueden afectar negativamente a la biología celular que se estudia en el experimento.

Cuando se usa en combinación con medios limitantes que carecen de leucina y metionina, los derivados fotoactivables se tratan como aminoácidos naturales por la maquinaria de síntesis de proteínas celulares . Como resultado, se pueden sustituir por leucina o metionina en la estructura primaria de las proteínas. Los derivados de la foto-leucina y la foto-metionina contienen anillos de diazirina que se activan cuando se exponen a la luz ultravioleta para convertirse en intermedios reactivos que forman enlaces covalentes con las cadenas laterales y la columna vertebral de las proteínas cercanas. Las proteínas que interactúan naturalmente dentro de la célula pueden quedar atrapadas instantáneamente mediante la fotoactivación de las proteínas que contienen diazirina en las células cultivadas. Los complejos de proteínas reticulados pueden detectarse mediante una movilidad reducida en SDS-PAGE seguida de transferencia Western , cromatografía de exclusión por tamaño , sedimentación en gradiente de densidad de sacarosa o espectrometría de masas .

Referencias

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