GeneCalling - GeneCalling

En el campo de la genómica , GeneCalling es una técnica de perfil transcripcional de ARNm de plataforma abierta . El protocolo GeneCalling mide los niveles de ADNc , que se correlacionan con los niveles de expresión génica de transcripciones específicas . En esta tecnología se examinan y comparan las diferencias entre la expresión génica en tejidos sanos y los tejidos que responden a enfermedades o fármacos. La técnica se ha aplicado al estudio de tejidos humanos y tejidos vegetales.

Método

Proceso GeneCalling

En el protocolo GeneCalling, los ARNm se aíslan primero de una muestra determinada y se procesan en fragmentos para su análisis. Por lo general, esto implica la síntesis y subdivisión de ADNc bicatenarios a partir de ARN poliA . A continuación, pueden usarse conjuntos distintos de enzimas de restricción para digerir conjuntos de ADNc divididos y los fragmentos resultantes ligados a adaptadores marcados para amplificarlos mediante PCR . A continuación, los productos de PCR se purifican y se someten a electroforesis en gel en una plataforma montada que emplea excitación láser estacionaria y un sistema de formación de imágenes de dispositivo de carga acoplada de varios colores . Una etiqueta fluorescente en el extremo 5 'de uno de los cebadores de PCR permite la visualización de los fragmentos de PCR, y los ADNc se someten a varios digestiones de restricción aislados e idénticos para generar un perfil combinado basado en la altura y la varianza de los picos. Los perfiles de digestión fusionados de las preparaciones de cDNA se comparan luego para localizar fragmentos expresados ​​diferencialmente (tales como entre tejido normal y tejido enfermo o sensible al fármaco); estos perfiles se comparan mediante varias bases de datos listas para Internet, como GeneScape.

Referencias

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